JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 3:31 min • July 8th, 2025
Zacznij od chipa mikromacierzy przeciwciał z wydrukowanymi specyficznymi przeciwciałami.
Każda plamka zawiera unikalne przeciwciało przeciwko określonemu szczepowi sinicy.
Traktuj chip za pomocą bufora blokującego, aby zminimalizować niespecyficzne interakcje.
Zmontuj chip w kasecie hybrydyzacyjnej posiadającej wiele dołków.
Wprowadź próbkę środowiskową do studzienek i inkubuj ją w zoptymalizowanych warunkach.
Próbka zawiera różne bakterie, w tym różne szczepy cyjanobakterii, które oddziałują ze specyficznymi przeciwciałami na wydrukowanym chipie. Umyj chip, aby usunąć niezwiązane bakterie.
Dodać mieszaninę przeciwciał zawierającą znakowane fluoroforem przeciwciała szczepu anty-sinicowego oddziałujące ze specyficznymi antygenami na odpowiednich komórkach sinic. Usuń niezwiązane przeciwciała.
Zdemontuj kasetę, umyj i osusz chip, a następnie zeskanuj go.
Fluorescencja w określonych miejscach oznacza obecność określonych szczepów sinic w próbce.
Ustaw szkiełko w kasecie hybrydyzacyjnej mikromacierzy o wymiarach 3 na 8 dołków, postępując zgodnie z instrukcjami dostawcy. Alternatywnie, po zmodyfikowaniu wzoru drukowania przeciwciał, skonfiguruj niestandardową kasetę, taką jak ta pokazana tutaj, lub po prostu użyj slajdów okładkowych do konfiguracji.
Po zmontowaniu szkiełka i kasety należy odpipetować do 50 mikrolitrów każdej próbki ekstraktu lub rozcieńczyć ją w buforze inkubacyjnym do ekstrakcji do każdej studzienki kasety. Alternatywnie, załaduj próbki do innych urządzeń inkubacyjnych lub po prostu użyj szkiełek podstawowych.
Jako ślepą próbę należy odpipetować 50 mikrolitrów buforu TBST-RR do co najmniej dwóch oddzielnych dołków kasety. Próbki należy inkubować w temperaturze otoczenia przez 1 godzinę i mieszać pipetując co 15 minut lub inkubować w temperaturze 4 stopni Celsjusza przez 12 godzin.
Aby umyć mikromacierze, odłóż kasetę i ostrożnie postukaj nią o czysty chłonny papier. Następnie umyj studzienki, dodając do każdej z nich 150 mikrolitrów buforu do inkubacji ekstrakcyjnej i usuń bufor, stukając w papier chłonny, jak poprzednio. Powtórz pranie jeszcze trzy razy.
Do każdej studzienki dodaj 50 mikrolitrów mieszaniny przeciwciał fluorescencyjnych, która zawiera 17 przeciwciał szczepu antycyjanobakteryjnego. Próbki należy inkubować w temperaturze otoczenia przez 1 godzinę lub w temperaturze 4 stopni Celsjusza przez 12 godzin.
Aby umyć mikromacierze, ostrożnie odłóż kasetę i delikatnie postukaj nią o czysty chłonny papier. Następnie dodaj 150 mikrolitrów buforu do inkubacji ekstrakcji przed usunięciem go przez stukanie w ręcznik papierowy. Powtórz pranie trzy razy. Następnie zdemontuj kasetę i zanurz szkiełko w roztworze 0,1x PBS w celu szybkiego spłukania. Szybko odwirować jak poprzednio, aby wysuszyć szkiełko.
Za pomocą skanera fluorescencyjnego zeskanuj szkiełko w poszukiwaniu fluorescencji przy maksymalnym piku emisji dla barwnika fluorescencyjnego dalekiej czerwieni. Wykonaj kilka zdjęć mikromacierzy przy różnych parametrach skanowania, zmieniając wartość wzmocnienia.
Niniejsze badanie opisuje metodę wykrywania specyficznych szczepów cyjanobakterii z wykorzystaniem matrycy przeciwciał. Proces ten obejmuje traktowanie próbek środowiskowych przeciwciałami w celu identyfikacji i ilościowego określenia różnych interakcji cyjanobakterii.
Chipowe macierze przeciwciał umożliwiają multipleksową detekcję szczepów cyjanobakterii w złożonych próbkach środowiskowych, wspierając wysokoprzepustową charakterystykę biologiczną. Możliwość ta usprawnia procesy wczesnego wykrywania, dostarczając ilościowe dane specyficzne dla poszczególnych szczepów, które są kluczowe dla walidacji celów oraz ograniczania ryzyka mechanistycznego. Podejście to jest istotne dla zespołów biofarmaceutycznych poszukujących niezawodnych i skalowalnych narzędzi do profilowania mikrobiologicznego oraz opracowywania testów analitycznych.
Ta technika mikrotablic przeciwciał wpisuje się w kontinuum od etapu odkrywania do badań przedklinicznych, umożliwiając wczesne profilowanie mikrobiologiczne i wspierając decyzje dotyczące identyfikacji związków wiodących.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026