JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Weźmy płytkę wielodołkową zawierającą komórki ssaków zamknięte w systemie hydrożelowym naśladującym naturalne środowisko macierzy zewnątrzkomórkowej.
Usuń pożywkę hodowlaną. Potraktuj buforem utrwalającym, aby usieciować białka, zachowując integralność komórkową.
Dodaj roztwór zawierający detergent, aby przepuszczalnie błonę komórkową.
Wprowadzić roztwór blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych w kolejnych krokach.
Dodaj pierwszorzędowy koktajl przeciwciał, który wnika do komórek i wiąże się specyficznie z cytoplazmatycznymi włóknami pośrednimi i docelowym czynnikiem transkrypcyjnym.
Usunąć niezwiązane przeciwciała. Wprowadź znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe i barwnik jądrowy, aby znakować DNA fluorescencyjnie.
Usuń niezwiązane cząsteczki.
Zamontuj kulturę hydrożelu na szkiełku za pomocą podłoża mocującego.
Użyj mikroskopu konfokalnego, aby obserwować komórki wybarwione immunologicznie.
Najpierw odessaj pożywkę z każdej studzienki. Następnie umyj studzienki 1 mililitrem ciepłego DPBS. Po zakończeniu mycia dodaj 750 mikrolitrów roztworu utrwalającego do każdej studzienki. Następnie inkubować 24-dołkową płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych