Ocena wewnątrzkomórkowej dystrybucji koniugatów przeciwciał zmodyfikowanych peptydami pochodzącymi z wirusa
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:59 min. • July 8th, 2025
Zacznij od przylegających ludzkich komórek erytroblastów.
Wprowadź koniugaty przeciwciał pochodzących od wirusa, zmodyfikowane peptydami. Te koniugaty zawierają sekwencję lokalizacji jądrowej lub NLS wirusa oraz resztę kwasu cholowego.
Podczas inkubacji koniugaty przeciwciał oddziałują z receptorami na powierzchni komórki i internalizują się w endosomach.
Kwas cholowy w koniugacie pomaga uciec z kompartmentu endosomalnego, umożliwiając akumulację wewnątrzkomórkową, podczas gdy białka transportowe i NLS ułatwiają ich lokalizację jądrową.
Wprowadź trypsynę i bufor zawierający EDTA, aby odłączyć komórki i usunąć koniugaty związane z powierzchnią.
Dodaj podłoże wzbogacone serum, aby zahamować aktywność trypsyny.
Odwirować, aby zebrać komórki; utrwalić je i przepuszczalnie.
Wprowadzić dalekoczerwone przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, wiążąc się z zlokalizowanymi koniugatami i przemyć.
Potraktuj jądrowym barwnikiem barwiącym.
Obserwuj pod mikroskopem konfokalnym i rejestruj obrazy na różnych głębokościach płaskich.
Po przetworzeniu obrazu komórka wykazuje małe zielone ogniska fluorescencyjne wewnątrz cytoplazmy i jądra, potwierdzając wewnątrzkomórkową dystrybucję koniugatów
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych