Wykrywanie i pomiar peptydów docelowych za pomocą pojemnościowego biosensora immunoprobe

Zacznij od zmontowanego drutu platynowego pokrytego perfluoroalkoksylem z warstwą polidopaminy.

Zanurz tę sondę w roztworze zawierającym przeciwciała specyficzne dla peptydu docelowego, które unieruchamiają polidopaminę, tworząc immunosondę.

Umyj i umieść immunosondę w komorze przepływowej z elektrodą uziemiającą z chlorku srebra, tworząc obwód.

Najpierw wprowadź bufor i przyłóż napięcie, aby aktywować immunosondę, umożliwiając jej działanie jako bateria lub kondensator, magazynując energię w postaci ładunku elektrycznego.

Nagraj sygnał elektryczny, aby wygenerować linię bazową.

Teraz wystaw bioczujnik na działanie roztworu zawierającego docelowe peptydy.

Peptydy te wiążą się z przeciwciałami na sondzie, powodując zmianę lokalnego ładunku i energii zmagazynowanej w biosensorze.

Nagraj sygnał elektryczny. Wzrost sygnału wskazuje na obecność docelowego peptydu, podczas gdy wielkość tego sygnału koreluje ze stężeniem docelowego peptydu.

Najpierw wytnij 25-centymetrowy drut platynowy pokryty perfluoroalkoksy. Następnie za pomocą skalpela usuń około 5 milimetrów powłoki perfluoroalkoksylowej z jednego końca, uważając, aby nie przeciąć drutu platynowego. Teraz włóż odizolowany koniec platynowego przewodu do pozłacanego, 1-milimetrowego męskiego styku złącza. Następnie za pomocą szczypiec do wąskich końcówek zaciska zęby styku złącza wokół odizolowanego końca drutu platynowego i przewód platynowy do pozłacanego styku złącza.

Następnie przygotuj roztwór dopaminy, dodając 50 miligramów chlorowodorku dopaminy w 50 mililitrach 10-milimolowego PBS o pH 6 i wymieszaj, mieszając. Po całkowitym rozpuszczeniu dopaminy umieść końcówkę drutu platynowego w naczyniu zawierającym świeżo przygotowany PBS uzupełniony dopaminą. Podłącz elektrodę krążkową chlorku srebra do kanału uziemiającego w stopniu głównym. Następnie umieść krążek chlorku srebra w naczyniu zawierającym PBS uzupełniony dopaminą i drut platynowy.

Przed kontynuowaniem podłącz bocznik przewodu do kanałów odniesienia stopnia głównego. Otwórz interaktywne oprogramowanie do akwizycji danych i ustaw protokół potencjału dowodzenia elektroosadzania piłokształtnego, ustawiając potencjał początkowy na minus 0,6 wolta, potencjał końcowy na 0,65 wolta, szybkość skanowania na 0,04 wolta na sekundę i czas osadzania na 420 sekund.

Po zakończeniu osadzania polidopaminy usuń zmielony granulat chlorku srebra i końcówkę drutu platynowego z naczynia. Umieść końcówkę drutu w mikroprobówce zawierającej PBS o pH 7,4 na 2 do 5 minut i upewnij się, że końcówka drutu nie styka się z bokami ani dnem mikrorurki. Następnie przygotuj roztwór przeciwciała, łącząc interesujące go przeciwciało z PBS o pH 7,4, w stosunku 1 do 20, w naczyniu o odpowiedniej wielkości.

Następnie zanurz osadzoną polidopaminę końcówkę elektrody platynowej w roztworze przeciwciała na dwie godziny w temperaturze pokojowej, upewniając się, że końcówka z drutu platynowego jest zawieszona w roztworze i nie spoczywa na wewnętrznej powierzchni mikroprobówki. Umieść funkcjonalną końcówkę pojemnościowej immunosondy w komorze przepływowej, uważając, aby w żaden sposób nie naruszyć końcówki elektrody, ponieważ może to spowodować uszkodzenie końcówki sensorycznej sondy.

Przed pierwszym testem eksperymentalnym wykonaj standardowy przebieg TBS, aby skonfigurować pojemnościową immunosondę, a dla protokołu napięcia ustaw dodatni potencjał kroku na 110 miliwoltów, ujemny potencjał krokowy na minus 5 miliwoltów, czas trwania kroku 20 milisekund, a czas akwizycji na 600 sekund.

Następnie utwórz interesujący Cię roztwór peptydowy, używając tego samego TBS. Aby zachować skład superfusatu, należy skonfigurować system kolektora, w którym superfusat może być przełączany między TBS a TBS uzupełnionym peptydami. Użyj standardowych parametrów TBS i skonfiguruj protokół akwizycji danych wykrywających peptydy, ustawiając czas trwania akwizycji na 360 sekund.