Technika in vitro do badania transportu receptorów glutaminianu w neuronach hipokampa
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:27 min. • July 8th, 2025
Pobrać trzy próbki kultur neuronalnych hipokampa na szkiełkach nakrywkowych.
Wprowadź przeciwciała pierwszorzędowe, aby oznaczyć receptory glutaminianu o ekspresji powierzchniowej.
Dodać kondycjonowaną pożywkę do drugiej i trzeciej próbki, aby wywołać endocytozę receptorów związanych z przeciwciałami.
W trzeciej próbce dodaj fragmenty Fab, aby zablokować epitopy na przeciwciałach nieendocytozowanych.
Wprowadź inhibitor, aby zablokować endocytozę receptora, jednocześnie umożliwiając recykling receptora na powierzchnię.
We wszystkich próbkach utrwal komórki i dodaj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu etykietowaniu.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, aby oznaczyć przeciwciała pierwszorzędowe na receptorach związanych powierzchniowo, w tym przeciwciała pochodzące z recyklingu.
Przepuszczalność błon komórkowych.
Ponownie dodać przeciwciało pierwszorzędowe do pierwszej próbki, aby oznaczyć istniejące wcześniej receptory endocytozowane.
Wprowadź różne przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem do wszystkich próbek, aby oznaczyć przeciwciała pierwszorzędowe związane z endocytozowanym receptorem, rozróżniając receptory endocytozowane i związane powie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych