JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:24 min. • July 8th, 2025
Weź probówkę zawierającą zawiesinę ludzkich bakterii jelitowych.
Dodaj cząsteczki podobne do ludzkiego wirusa norowirusowego lub VLP. VLP zawierają nienaruszony kapsyd wirusa, ale nie mają genomowego RNA, co czyni je niezakaźnymi dla ludzi.
Podczas inkubacji białka kapsydu VLP wiążą się ze specyficznymi węglowodanami ulegającymi ekspresji na powierzchni bakterii, tworząc kompleksy VLP-bakterie.
Odwirować w celu osadzenia kompleksów i odrzucenia niezwiązanych VLP.
Wprowadzić roztwór blokujący zawierający białko, aby zablokować niespecyficzne miejsca wiązania przeciwciał, zmniejszając barwienie tła w kolejnych krokach.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała specyficzne dla VLP i inkubuj.
Przeciwciała wiążą się ze swoimi miejscami docelowymi na kapsydzie VLP, znakując kompleksy bakterii VLP.
Wirówka do granulowania kompleksów. Odrzucić niezwiązane przeciwciała i ponownie zawiesić osad w buforze cytometrii przepływowej.
Za pomocą cytometru przepływowego wykryj sygnały fluorescencyjne emitowane przez kompleksy bakterii VLP, co pozwoli na ilościowe określenie procentowej zawartości bakterii związanych w próbce.
Po przygotowaniu odczynników, przeciwciał i bakterii zgodnie z opisem
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych