JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:01 min. • July 8th, 2025
Weźmy kriosekcję tkankową raka nerkowokomórkowego wykazującą naciekające limfocyty T CD8 + w mikrośrodowisku guza.
Potraktuj go acetonem, aby naprawić i przepuszczalność tkanki. Umyć, aby usunąć nadmiar acetonu.
Dodaj awidynę, aby nasycić endogenną biotynę tkankową. Następnie dodaj biotynę, aby zablokować unieruchomione miejsca wiązania awidyny, minimalizując niespecyficzne interakcje.
Zastosuj surowicę zawierającą immunoglobuliny, aby zablokować receptory Fc komórek odpornościowych, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodać pierwszorzędowy koktajl przeciwciał ukierunkowany na CD8, cytotoksyczny marker limfocytów T, oraz PD-1 i Tim-3, receptory hamujące ulegające ekspresji przez subpopulacje limfocytów T CD8 + oporne na immunoterapię.
Wprowadź odrębne przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem skierowane przeciwko przeciwciałom anty-CD8 i anty-Tim-3.
Dodać biotynylowane przeciwciała drugorzędowe skierowane przeciwko przeciwciałom anty-PD-1 i inne znakowane fluoroforem streptawidynę wiążące się z biotyną.
Nałożyć podłoże mocujące zawierające barwnik na wybarwienie jąder komórkowych i umieścić szkiełko nakrywkowe.
Uzyskaj wielospektralne obrazy fluorescencyjne, a
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych