JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:19 min. • July 8th, 2025
Zacznij od szkiełka zawierającego przylegające komórki gospodarza.
Dodaj wirusy i pozwól im dostać się do komórek gospodarza.
Usuń zużyte medium. Dodaj świeżą pożywkę, aby umożliwić syntezę i transport białek wirusa.
Użyj paraformaldehydu, aby zachować morfologię komórek i lokalizację białka.
Dodaj cząsteczki detergentu, aby komórki były przepuszczalne.
Zastosuj bufor blokujący, aby zablokować miejsca powiązań inne niż docelowe.
Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które wiążą docelowe białka wirusowe. Usuń niezwiązane przeciwciała.
Nakładka z czerwonymi przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem do fluorescencyjnego znakowania białek wirusa. Usuń niezwiązane przeciwciała.
Dodaj fluorescencyjny barwnik jądrowy zawierający pożywkę montażową, aby zabarwić jądra.
Za pomocą mikroskopii konfokalnej obserwuj położenie białek wirusowych o czerwonej fluorescencji i jąder gospodarza o niebieskiej fluorescencji.
Silniejszy czerwony sygnał wokół niebieskiego obszaru wskazuje na lokalizację cytoplazmatyczną, podczas gdy silniejszy sygnał wewnątrz sugeruje lokalizację jądrową.
Równe poziomy sygnału w niebieskim obszarze i wokół niego wskazują, że białka znajdują się zarówno w jądrze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych