Metoda in vitro do identyfikacji wrodzonych i adaptacyjnych komórek odpornościowych znajdujących się w płucach myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:54 min. • July 8th, 2025
Weź mieloną mysią tkankę płucną do buforu do trawienia i inkubuj w temperaturze fizjologicznej.
Enzymy buforowe rozkładają macierz tkankową, rozluźniając komórki.
Przeprowadzić rozcieranie w celu dysocjacji masy komórkowej i przefiltrować zawiesinę za pomocą sitka w celu wyizolowania pojedynczych komórek.
Odwirować w celu usunięcia supernatantu z resztkami tkanki. Inkubować komórki z buforem do lizy w celu lizy czerwonych krwinek.
Odwirować w celu odrzucenia supernatantu zawierającego szczątki komórkowe. Ponownie zawieś komórki i przenieś je na mikropłytkę.
Dodaj przeciwciała, aby zablokować receptory Fc, zapobiegając barwieniu tła.
Wprowadź znakowany fluoroforem koktajl przeciwciał ukierunkowany na specyficzne markery powierzchniowe na wrodzonych komórkach odpornościowych - monocytach, makrofagach, komórkach dendrytycznych, komórkach NK, neutrofilach, eozynofilach i adaptacyjnych komórkach odpornościowych - limfocytach B i T.
Napraw i przepuszczalność komórek. Dodaj przeciwciała znakowane fluoroforem specyficzne dla markera wewnątrzkomórkowego na monocytach, makrofagach, komórkach dendrytycznych i eozynofilach.
Za pomocą cytometrii przepływowej sklasyfikuj znakowane komórki odporn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych