JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:50 min. • January 15th, 2026
Zacznij od probówki zawierającej neutrofile. Dodać bufor zawierający inhibitor proteinazy, aby zapobiec degradacji białka.
Dodaj odpowiedni detergent, aby przepuszczalność błony neutrofili
W kąpieli lodowej sonikuj próbkę za pomocą fal dźwiękowych o wysokiej częstotliwości, aby przerwać błonę komórkową, uwalniając zawartość wewnątrzkomórkową, w tym różne białka.
Krótko odwirować, aby zebrać zawartość ze ścianek probówki i przenieść ją do odpowiedniej probówki.
Wprowadź środek redukujący i inkubuj w wysokiej temperaturze, aby przyspieszyć rozszczepienie wiązań dwusiarczkowych, powodując denaturację białek.
Ostudzić i wprowadzić odczynnik alkilujący, który alkiluje grupy sulfhydrylowe.
Dodaj zimny aceton, aby wywołać wytrącanie białek.
Wirować w celu osadzania białek i fragmentów komórek. Usunąć supernatant i wysuszyć na powietrzu.
Wprowadzić bufor zawierający środek denaturujący i sonikować w celu ponownego rozpuszczenia osadu białkowego.
Na koniec dodaj mieszankę proteaz, która rozszczepia białka. Przechowywać próbkę do dalszego przetwarzania.
Na początek zbierz zróżnicowane neutrofile komórki HL60 w 15-mililitrowej probówce, odwirowując próbki pod ciśnieniem 400 razy g przez 5 min
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych