JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:43 min. • January 15th, 2026
Weź STop And Go Extraction lub STAGE Tip, zminiaturyzowaną kolumnę oczyszczającą.
Końcówka zawiera małe kulki krzemionki połączone z długimi łańcuchami węglowodorowymi w celu oczyszczania peptydów opartych na oddziaływaniach hydrofobowych.
Przemyć zawierającymi wysoki procent acetonitrylu, usuwając zanieczyszczenia żywiczne.
Wprowadzić bufor wiążący i odwirówkę, równoważąc kolumnę w celu optymalnego wiązania peptydów.
Załadować wstępnie strawioną próbkę peptydu uzyskaną ze zróżnicowanych komórek podobnych do neutrofili, zawierającą fragmenty peptydów i zanieczyszczenia, w tym sole.
Odwirować w celu przepuszczenia próbki przez kolumnę. Fragmenty peptydów wiążą się z łańcuchami węglowodorowymi poprzez oddziaływania hydrofobowe, podczas gdy sole są usuwane.
Dodać bufor wiążący i odwirówkę, usuwając pozostałe zanieczyszczenia.
Wprowadzić bufor o wysokiej zawartości acetonitrylu do elucji.
Za pomocą strzykawki przepuścić bufor przez kolumnę. Acetonitryl wiąże się z łańcuchami węglowodorowymi, wypierając fragmenty peptydu, które eluują wraz z buforem.
Wykonaj profilowanie proteomiczne, aby zidentyfikować oczyszczone peptydy.
Na początek zapakuj trzy warstwy żywicy C18 w końcówkę pipety o
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych