JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:30 min. • January 15th, 2026
Zacznij od seryjnie rozcieńczonej ludzkiej surowicy zawierającej różne stężenia przeciwciał neutralizujących przeciwko koronawirusowi zespołu ciężkiej ostrej niewydolności oddechowej 2 lub SARS-CoV-2.
Wprowadź pseudotypowane wirusy z lucyferazy RNA, integrazą i odwrotną transkryptazą, zamknięte w dwuwarstwie lipidowej zawierającej białka kolców SARS-CoV-2.
Przeciwciała neutralizują wirusy na podstawie rozcieńczenia surowicy, przy czym niższe rozcieńczenia wykazują maksymalną neutralizację.
Wprowadzić komórki docelowe eksprymujące receptory konwertazy angiotensyny-2 lub receptory ACE2 i transbłonową proteazę serynę-2 lub TMPRSS2.
W wyższych rozcieńczeniach surowicy niezneutralizowane wirusy oddziałują z receptorami ACE2, podczas gdy TMPRSS2 rozszczepiają białko kolca, umożliwiając fuzję wirusa.
Po wejściu RNA lucyferazy jest odwrotnie transkrybowane do DNA, które integruje się z genomem gospodarza i wytwarza enzym lucyferazy.
Zastąp pożywkę buforem testowym zawierającym substrat lucyferazy i czynnik lizujący.
Komórki ulegają lizie, uwalniając wewnątrzkomórkową lucyferazę, która oddziałuje z substratem i wytwarza wysoką luminescencję.
Określ ilościowo luminescencję w rozcieńczeniach
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych