Pomiar poziomu immunoglobuliny G w stosunku do testowanej szczepionki w surowicy myszy

Rozpocząć od płytki wielodołkowej pokrytej szczepionką testową i zablokować niespecyficzne miejsca interakcji.

Pobrać próbkę surowicy od myszy, której wstrzyknięto szczepionkę testową.

Surowica ta zawiera immunoglobulinę G lub IgG, przeciwciała, które rozpoznają badaną szczepionkę.

Do studzienek pokrytych szczepionką dodać seryjnie rozcieńczone próbki surowicy.

IgG wiążą się ze szczepionką. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.

Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z peroksydazą, które wiążą się z IgG. Usuń niezwiązane przeciwciała drugorzędowe.

Dodaj podłoże chromogenne. Peroksydaza oddziałuje z substratem, wytwarzając produkt o niebieskim kolorze.

Wprowadź kwas, aby zatrzymać reakcję. Zmiana pH powoduje żółknięcie roztworu.

Za pomocą spektrofotometru zmierz intensywność koloru każdej studzienki, aby określić stężenie IgG w próbce surowicy.

W przypadku powlekania antygenem w teście immunoenzymatycznym lub płytce ELISA, rozcieńczyć antygen białkowy HI do 10 mikrogramów na mililitr roztworem powlekającym i dodać 100 mikrolitrów rozcieńczonego antygenu na basenik do płytki ELISA. Inkubuj płytkę w temperaturze 4 stopni Celsjusza przez noc. Po inkubacji umyć płytkę 300 m