JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:34 min. • July 8th, 2025
Zacznij od komórek ssaków zakażonych wirusem, które wytwarzają wiele kaspaz, w tym kaspazę-3.
Dodać pożywkę wzrostową do studzienki kontrolnej i pożywkę uzupełnioną inhibitorem kaspazy-3 do studzienki testowej.
W studzience kontrolnej kaspaza-3 rozpoznaje i degraduje nukleoproteiny wirusa i białka gospodarza niezbędne do namnażania się wirusa.
W studzience testowej inhibitor dostaje się do komórki, hamując aktywność kaspazy-3 i zapobiegając degradacji białka.
Usuń komórki z płytki. Dodaj odczynnik do lizy i podgrzej, aby wywołać lizę komórek, uwalniając białka wewnątrzkomórkowe.
Załaduj obie próbki na żel poliakryloamidowy SDS i elektroforezę, aby oddzielić białka w zależności od wielkości.
Po elektroforezie przenieś żel do błony bibułowej.
Potraktuj błonę pierwszorzędowymi przeciwciałami przeciwko nukleoproteinom wirusa i białkom gospodarza.
Przemyć i nałożyć na siebie przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, wiążące się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, generujące prążki fluorescencyjne.
Wyższa fluorescencja w badanej próbce wskazuje na zmniejszone rozszczepienie wirusa i białka gospodarza za pośrednictwem kaspazy-3 w porównaniu z kontrolą.
Na początek wysiewaj komórk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych