Izolowanie niezmiennych limfocytów T NK z modelu mysiego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:35 min. • July 8th, 2025
Zacznij od dootrzewnowego wstrzyknięcia syntetycznego glikolipidu myszy.
Komórki prezentujące antygen lub APC internalizują glikolipid i prezentują go za pośrednictwem nieklasycznej cząsteczki MHC CD1d.
APC migrują do śledziony i oddziałują z niezmiennymi limfocytami T NK lub komórkami iNKT, indukując aktywację i proliferację komórek iNKT.
Zbierz śledzionę. Mechanicznie go dysocjować, aby wytworzyć zawiesinę jednokomórkową.
Przenieś komórki do probówki. Dodaj pożywkę o gradiencie gęstości i odwiruj, aby oddzielić limfocyty.
Zbierz limfocyty. Dodaj tetramery CD1d znakowane antygenem glikolipidowym, znakowane fluoroforem, które oddziałują z komórkami iNKT.
Usuń niezwiązane tetramery. Nakładka z mikrokulkami magnetycznymi, które wiążą się z fluoroforami połączonymi z tetramerami.
Usuń niezwiązane kulki i załaduj zawiesinę ogniwa na kolumnę magnetyczną.
Pod wpływem pola magnetycznego komórki iNKT związane z koralikami są zatrzymywane w kolumnie, podczas gdy pozostałe komórki przepływają przez nią.
Usuń kolumnę z pola magnetycznego. Dodaj bufor elucyjny, aby wymyć komórki iNKT.
Wstrzyknąć normalną mysz DBA/1 dootrzewnowo z alpha-GalCer, w dawce 0,1 miligrama na kilogram masy ciała. Trzy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych