Wzmacnianie transdukcji wirusa w komórkach NK za pomocą polimeru kationowego

Weźmy na przykład komórki NK (natural killer). Dodaj wektory lentiwirusowe składające się z enzymów wirusowych i zmodyfikowanych cząsteczek RNA, które kodują białko fluorescencyjne.

Dodaj polimery kationowe i osadź komórki i wirusy.

Polimery neutralizują ładunki ujemne zarówno wirusa, jak i komórki, ułatwiając fuzję błonową.

RNA jest odwrotnie transkrybowane do DNA i integrowane z genomem gospodarza, umożliwiając ekspresję białek fluorescencyjnych.

Dodaj pożywkę uzupełnioną cytokiną interleukiną-2 lub IL-2.

IL-2 wyzwala sygnalizację wewnątrzkomórkową, która sprzyja przeżyciu i proliferacji komórek NK przy jednoczesnym zachowaniu ekspresji transgenu.

Przenieś mieszaninę do dobrze pokrytej przeciwciałami, które wiążą się ze specyficznymi immunoreceptorami na komórkach NK, pobudzając je do uwalniania cytokin przeciwwirusowych.

Określ ilościowo uwolnione cytokiny, aby ocenić wpływ polimeru na produkcję cytokin.

Dodaj barwniki fluorescencyjne, aby oznaczyć DNA komórek martwiczych.

Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj żywe komórki i określ ilościowo sygnał białka fluorescencyjnego, aby zmierzyć wydajność transdukcji indukowanej przez polimer

.

Zawiesić mysie lub ludzkie pierwotn