JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:23 min. • July 8th, 2025
Zacznij od ludzkich komórek krwi pępowinowej, w tym hematopoetycznych komórek macierzystych CD34+ lub HSC.
Dodaj przeciwciała, aby zablokować komórkowe receptory Fc, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu kulek magnetycznych specyficznych dla HSC.
Wprowadzić kulki magnetyczne pokryte przeciwciałami skierowane do HSC CD34+. Odwirować i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawieś komórki w buforze. Przepuścić je przez separator magnetyczny, aby zatrzymać HSC związane z koralikami; przepływają niezwiązane komórki.
Usuń pole magnetyczne, aby zebrać HSC.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w pożywce wzrostowej. Umieść komórki na płytce i inkubuj.
Pożywka zawiera czynniki wzrostu i cytokiny, które sprzyjają przetrwaniu i ekspansji HSC.
Zbierz komórki. Dodaj pożywkę do zamrażania, przenieś do kriowialu i zamroź.
Aby wytworzyć ludzki układ odpornościowy lub mysi model HIS, należy rozmrozić HSC. Dodaj je do wstępnie podgrzanego podłoża.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w buforze.
Komórki są gotowe do wstrzyknięcia do mleka myszy z niedoborem odporności w celu wygenerowania modelu HIS.
Na początek ponownie zawieś CD34-dodatni osad komórkowy wyizolowany z krwi pępowinowej w 300 mikrolitrach
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych