JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:26 min • July 8th, 2025
Weźmy mysz z obniżoną odpornością, która posiada tylko neutrofile i monocyty jako funkcjonalne komórki odpornościowe.
Dootrzewnowo wstrzyknąć cyklofosfamid, lek ukierunkowany na immunologiczne komórki progenitorowe.
Lek wnika do aktywnie proliferujących immunologicznych komórek progenitorowych i sieciuje kwasy nukleinowe, powodując śmierć komórki. Śmierć komórek progenitorowych prowadzi do wyczerpania komórek odpornościowych.
Doustnie podawać disulfiram, lek, który tworzy addukt z cyklofosfamidem, zmniejszając skutki uboczne wywołane cyklofosfamidem.
Podskórnie wstrzyknąć mieszaninę ludzkich komórek nowotworowych i komórek jednojądrzastych krwi obwodowej lub PBMC w odpowiedniej galaretowatej mieszaninie białek.
Mieszanina białek tworzy żel, naśladując fizjologiczną macierz zewnątrzkomórkową i więzi komórki nowotworowe.
Funkcjonalne wyczerpanie komórek odpornościowych umożliwia namnażaniu się komórek nowotworowych i tworzeniu nowych naczyń krwionośnych, przekształcając się w ksenoprzeszczep guza litego.
Jednocześnie limfocyty T z wstrzykniętych PBMC infiltrują guz.
Ksenoprzeszczep guza wykazuje wzrost i limfocyty T naciekające nowotwór, ustanawiając humanizowany model myszy ksenoprzeszczepu.
W przypadku wyczerpania komórek szpikowych dootrzewnowo podawaj 100 miligramów na kilogram cyklofosfamidu, a doustnie 125 miligramów na kilogram disulfiramu 6 do 8-tygodniowym samicom myszy NOD/SCID raz dziennie przez dwa dni. 24 godziny po drugiej dawce cyklofosfamidu i disulfiramu ponownie zamieszaj 5 x 106 świeżo wyizolowany ludzki PBMC i 2,5 x 106 ludzkie komórki linii komórek nowotworowych w 200 mikrolitrach PBS plus 50% matrigelu na zwierzę i wstrzyknąć całą objętość podskórnie w prawą flankę każdego zwierzęcia doświadczalnego. Mierz i rejestruj objętość guza pierwotnego 2 razy w tygodniu przez 4 do 6 tygodni.