JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Weź dwie kuwety do elektroporacji. Jedna kuweta zawiera mały interferujący RNA lub siRNA, zaprojektowany w celu zahamowania produkcji FIP200, białka indukującego autofagię.
Druga kuweta zawiera zaszyfrowane siRNA jako kontrolę, która nie hamuje produkcji FIP200.
Dodaj niedojrzałe komórki dendrytyczne lub iDC; elektroporanuj w celu wejścia siRNA do komórki, a następnie płytkuj komórki.
Zinternalizowane siRNA wiąże się z indukującym RNA kompleksem wyciszającym.
Kompleks z siRNA specyficznym dla FIP200 rozszczepia docelowe mRNA, hamując produkcję FIP200, podczas gdy kontrolne iDC poddane działaniu siRNA wytwarzają FIP200.
Zbierz komórki i dodaj wirusa opryszczki pospolitej. Po fuzji błony komórkowej otoczki wirusa uwolnione DNA dostaje się do jądra i prowadzi do produkcji białek wirusowych i nukleokapsydów.
Białka wirusowe zaburzają laminy jądrowe. FIP200 tworzy kompleks, który uruchamia kaskadę sygnalizacyjną, indukując autofagię uszkodzonych laminy w celu ich degradacji i ułatwiając ucieczkę wirusowych nukleokapsydów do cytoplazmy.
Hamowanie produkcji FIP200 za pośrednictwem siRNA ogranicza autofagię laminy, zapobiegając ucieczce nukleokapsydu.
Komórki są gotowe do oceny indukowaneg
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych