JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:12 min • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej samicy myszy w pozycji leżącej, z guzami urotelialnymi w nabłonku pęcherza moczowego.
Zabezpiecz tylne nogi, zlokalizuj otwór cewki moczowej i wprowadź cewnik do pęcherza myszy. Umyj pęcherz, aby usunąć mocz.
Wstrzyknąć białko aktywujące neutrofile Helicobacter pylori lub HP-NAP - immunomodulujące białko bakteryjne.
W mikrośrodowisku guza HP-NAP oddziałuje z receptorami Toll-podobnymi na neutrofilach i inicjuje kaskadę sygnałową, zwiększając ekspresję cytokin prozapalnych.
Cytokiny wywołują różnicowanie naiwnych limfocytów T w limfocyty pomocnicze T typu 1 lub Th1 i cytotoksyczne typu 1 lub Tc1, które wytwarzają interferon gamma.
Interferon-gamma hamuje tworzenie nowych naczyń krwionośnych, ograniczając dostępność składników odżywczych i tlenu do guza.
Dodatkowo zwiększa poziom cząsteczek MHC prezentujących antygen nowotworowy na komórkach nowotworowych, ułatwiając interakcję z komórkami Tc1.
Ta interakcja powoduje uwolnienie cząsteczek cytotoksycznych, które indukują śmierć komórek nowotworowych, wykazując skuteczność przeciwnowotworową HP-NAP.
Co najmniej trzy dni po wstrzyknięciu komórek MB-49, po znieczuleniu zwierzęcia, cewnikować, jak właśnie pokazano, i za pomocą 1-mililitrowej strzykawki z 200 do 300 mikrolitrami sterylnego PBS, zmyć resztki moczu z pęcherza, odsysając cały płyn.
Wstrzyknąć 50 mikrogramów białka aktywującego neutrofile Helicobacter pylori lub HPNAP na 150 mikrolitrów PBS do pęcherza, pozostawiając strzykawkę przymocowaną do cewnika, aby uniknąć wycieku. Po godzinie delikatnie wyjmij cewnik z cewki moczowej i umieść mysz w klatce pod lampą grzewczą, aż się obudzi.