Hamowanie replikacji wirusa zapalenia wątroby typu B za pomocą limfocytów T specyficznych dla antygenu wirusowego

Weźmy limfocyty T z receptorami, które wiążą się z antygenami wirusa zapalenia wątroby typu B lub HBV.

Wstrzyknij limfocyty T do żyły ogonowej myszy.

Pozwól wstrzykniętym komórkom rozprzestrzenić się w wątrobie.

Aby naśladować infekcję wirusową, weź plazmidy przenoszące genom HBV.

Szybko wstrzyknij plazmidy do żyły ogonowej, kierując plazmidy do wątroby.

Siła cieczy przenika przez śródbłonek naczynia i generuje tymczasowe pory w komórkach.

Plazmidy dostają się do komórki i przechodzą syntezę RNA, wytwarzając mRNA, które jest wykorzystywane do produkcji białek wirusowych.

Niektóre z tych białek działają jak antygeny wirusowe.

Cząsteczki prezentujące antygen przenoszą antygeny wirusowe na powierzchnię komórki, wystawiając je na działanie limfocytów T.

Te komórki odpornościowe oddziałują z antygenami wirusowymi i inicjują mechanizmy eliminacji zainfekowanych komórek, hamując składanie i rozprzestrzenianie się białek wirusa.

W celu hydrodynamicznego dostarczania plazmidu HPV przez żyłę ogonową, rozcieńczyć 10 mikrogramów plazmidu HPV w 8% równoważniku masy ciała PBS. Załaduj plazmid do jednej 3-mililitrowej strzykawki wyposażonej w półcalową igłę o rozmiarze 26 na mysz.

Podgrzej myszy HHD pod lampą grzewczą przez pięć minut, aby rozszerzyć żyły ogonowe, i ostrożnie wciągnij mysz do plastikowego ogranicznika. Zlokalizuj rozszerzoną boczną żyłę ogonową w środkowej jednej trzeciej ogona i włóż igłę równolegle do żyły, aby dostarczyć całą objętość plazmidu przez żyłę ogonową w ciągu trzech do pięciu sekund.

W przypadku transferu adoptywnego komórek T CD8-dodatnich iPSC specyficznych dla antygenu wirusowego, należy zebrać limfocyty T iPSC CD8-dodatnie w 22 dniu hodowli, jak pokazano, i zasiać komórki na nowej 10-centymetrowej naczyniu do hodowli komórek.

Po 30 minutach w inkubatorze do hodowli komórkowych przefiltruj pływające komórki przez nylonowe sitko o średnicy 70 mikrometrów i policz żywe komórki. Rozcieńczony sprzedaje się do 1,5 x 10⁷ komórek na mililitr stężenia PBS.

Wstrzyknij 200 mikrolitrów komórek poszczególnym cztero- lub sześciotygodniowym myszom HHD do żyły ogonowej, jak właśnie pokazano. W 14 dniu po transferze komórek wykonaj hydrodynamiczne dostarczanie plazmidu HPV, jak pokazano.