JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:55 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od zawieszenia limfocytów T i potraktuj je lentiwirusami CAR przenoszącymi gen receptora antygenu chimerycznego lub lentiwirusów CAR i CRISPR.
lentiwirus CRISPR zawiera geny przewodnika RNA i nukleazy Cas9, a także gen oporności na antybiotyki.
Zarówno lentiwirusy CAR, jak i CRISPR oddziałują z limfocytami T i uwalniają ich RNA.
Te RNA są odwrotnie transkrybowane i przekształcane w odpowiednie DNA, które integruje się z DNA komórek T.
Umożliwia to syntezę białek CAR, przewodnikowych RNA i białek Cas9.
Przewodnik RNA tworzy kompleks z Cas9, który specyficznie rozpoznaje i wiąże się z docelowym genem w DNA komórek T.
Tymczasem Cas9 rozszczepia DNA, tworząc dwuniciowe pęknięcie.
Przerwa ta jest naprawiana przez niehomologiczne łączenie końców, podatny na błędy mechanizm naprawy, powodujący modyfikację genu docelowego.
W ten sposób powstają genetycznie zmodyfikowane limfocyty T z chimerycznymi receptorami antygenowymi.
Leczenie komórek antybiotykami w celu wyeliminowania niezmodyfikowanych limfocytów T i selektywnej izolacji genetycznie zmodyfikowanych limfocytów CAR T.
Aby zakłócić czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów, należy użyć przewodnika RNA,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych