JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:16 min • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy i podaj żywy atenuowany szczep BCG Mycobacterium bovis, który ma zmniejszoną zdolność choroboczą, przez nos myszy.
Wstrzyknięte bakterie stymulują odpowiedź immunologiczną w tkance płucnej i pobliskich węzłach chłonnych.
Prowadzi to do generowania efektorowych limfocytów T i limfocytów B, które dostają się do krążenia myszy.
Limfocyty efektorowe B wytwarzają przeciwciała przeciwko prątkom.
Tymczasem efektorowe limfocyty T osadzają się w tkance płucnej jako rezydujące limfocyty T pamięci lub limfocyty TRM, zapewniając długotrwałą odporność.
Aby ocenić skuteczność immunizacji, należy podawać żywe, zjadliwe prątki o zdolnościach chorobotwórczych przez nos myszy.
Powoduje to aktywację limfocytów TRM w tkance płucnej.
Aktywowane limfocyty TRM uwalniają cytokiny, przyciągając inne komórki odpornościowe, w tym efektorowe limfocyty B.
Te limfocyty B wydzielają przeciwciała, które wiążą się z prątkami, zwiększając ich usuwanie przez neutrofile, co wskazuje na udaną immunizację.
W przypadku podawania donosowego należy załadować mikropipetę 20 mikrolitrami zawiesiny BCG i umieścić znieczuloną mysz w pozycji leżącej wewnątrz kaptura. Podawać inokulum kroplami między dwoma nozdrzami, aż cała objętość 20 mikrolitrów zostanie zdeponowana, pozostawiając czas między kroplami, aby umożliwić myszy wdychanie zawiesiny. Następnie ponownie załaduj mikropipetę kolejnymi 20 mikrolitrami bakterii i powtórz podawanie.
W przypadku prowokacji donosowej szczepem H37Rv Mycobacterium tuberculosis, w odpowiednim eksperymentalnym punkcie czasowym po szczepieniu, należy zaszczepić zwierzęta donosowym podaniem 40 mikrolitrów zawiesiny bakteryjnej H37Rv, jak właśnie pokazano.