JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:58 min. • July 8th, 2025
Zacznij od dwukierunkowych plazmidów przenoszących cDNA kodujących pewne niezbędne białka wirusa szczepu grypy przystosowanego do przeziębienia.
Wprowadzenie nowego zestawu dwukierunkowych plazmidów zawierających hemaglutyninę i zmodyfikowane cDNA neuraminidazy z innego szczepu grypy.
Wprowadzić odczynnik do transfekcji do tej mieszaniny i inkubować, aby utworzyć kompleks z plazmidami.
Przenieś te kompleksy na hodowane ludzkie komórki podobne do nabłonka, aby umożliwić wejście plazmidu do komórki.
Dwukierunkowe plazmidy z dwoma promotorami w przeciwnych orientacjach umożliwiają produkcję białek wirusowych i odpowiadającego im RNA.
Inkubować komórki w niższej temperaturze.
Białka wirusowe i wirusowe RNA samoorganizują się, tworząc rekombinowane wirusy grypy przystosowane do zimna o zmniejszonej replikacji w cieplejszych warunkach.
Nakładka z komórkami MDCK z nadekspresją kwasu sjalowego i zmodyfikowanymi enzymami trypsyny, które umożliwiają przyczepianie się wirusa i wnikanie do wnętrza komórek.
Inkubować w tej samej temperaturze w celu wywołania replikacji i produkcji nowych wirusów.
Odwirować i zebrać rekombinowane żywe atenuowane wirusy grypy gotowe do przygotowania szczepionki.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych