Ocena skutków przeszczepu mikrobioty kałowej u myszy z niedoborem interleukiny-10

Zacznij od powściągliwej myszy pozbawionej interleukiny-10, cytokiny przeciwzapalnej, która powoduje zapalenie okrężnicy.

Weź strzykawkę wypełnioną zawiesiną kałową bogatą w różnorodne drobnoustroje jelitowe od zdrowej myszy.

Następnie podłącz rurkę doustną do strzykawki.

Włóż tę rurkę do ust, prowadząc ją w dół do żołądka myszy.

Teraz należy podać zawiesinę kałową bezpośrednio do żołądka, umożliwiając jej stopniowe dotarcie do okrężnicy.

W okrężnicy drobnoustroje kałowe namnażają się i kolonizują, przywracając drobnoustroje jelitowe.

Skolonizowane drobnoustroje uwalniają następnie różne metabolity wtórne.

Metabolity te pomagają w produkcji mucyny, która naprawia nabłonek okrężnicy i przywraca integralność jelit

.

W nabłonku jelita grubego drobnoustroje kałowe i ich metabolity oddziałują z komórkami odpornościowymi.

Ta interakcja powoduje, że komórki odpornościowe uwalniają cytokiny przeciwzapalne, co prowadzi do zmniejszenia stanu zapalnego okrężnicy u myszy z niedoborem interleukiny-10.

Przygotuj sterylny roztwór, dodając 10% roztwór glicerolu do zwykłej soli fizjologicznej. Dodaj 10 mililitrów tego roztworu do stożkowej probówki na każdy gram granulek kału. Homogenizować tę mieszaninę na niskich obrotach trzy razy przez 30 sekund, używając homogenizatora stołowego wewnątrz okapu wyciągowego w celu ponownego zawieszenia kału. Przefiltruj zawiesinę kałową przez dwie warstwy sterylnej gazy bawełnianej. Filtrat należy przechowywać tymczasowo w lodówce do sześciu godzin lub zapakować go w sterylne fiolki kriogeniczne i przechowywać w zamrażarce o temperaturze minus 80 stopni.

Dokładnie wyczyść homogenizator lub blender zgodnie ze standardową procedurą. Rozmrozić zamrożoną zawiesinę kału na lodzie, jeśli używa się zamrożonych próbek. Wymieszaj rozmrożoną zawiesinę kałową przez wirowanie. Przenieść świeżą lub rozmrożoną zawiesinę kałową do 1-mililitrowych strzykawek. Zważ myszy i wybierz odpowiedni rozmiar igły do zgłębnika oraz maksymalną objętość dawki.

Przetestuj igłębkę, mierząc długość od czubka nosa myszy do dolnej części mostka. Napełnić strzykawkę 10% glicerolem w roztworze soli fizjologicznej lub zawiesiny kałowej i usunąć pęcherzyki powietrza z wnętrza strzykawki i igły. Umieść jedną klatkę na myszy w szafie bezpieczeństwa biologicznego, zdejmij plastikową pokrywę klatki i pozostaw metalowy stojak na miejscu.

Otwórz metalowy stojak jedną ręką. Chwyć jedną mysz za ogon i połóż ją na metalowym stojaku. Jedną ręką trzymaj mysz za ogon, a drugą ręką kciukiem i środkowymi palcami drugiej ręki przytrzymuj zwierzę, chwytając skórę za ramiona. Delikatnie wyciągnij głowę zwierzęcia do tyłu i przytrzymaj głowę na miejscu jedną ręką. Umieść igłębkę na języku w jamie ustnej.

Delikatnie przesuwaj się wzdłuż górnego podniebienia, aż igła dotrze do przełyku. Przesunąć igłę płynnie jednym ruchem. Po prawidłowym umieszczeniu i sprawdzeniu igły, powoli podawać materiał, wciskając strzykawkę przymocowaną do igły. Po podaniu należy delikatnie wyciągnąć igłę. Oznacz mysz i umieść ją z powrotem w klatce domowej. Monitoruj zwierzę przez 5 do 10 minut, szukając oznak ciężkiego oddychania lub niepokoju. Należy ponownie monitorować myszy w okresie od 12 do 24 godzin po przeszczepie mikrobioty kałowej.