JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:55 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą komórki NK i komórki rakowe. Studzienki kontrolne zawierają tylko komórki rakowe.
Wirówka, aby ułatwić kontakt komórkowy.
Inkubować. Aktywacja receptorów na komórkach NK wiąże się z ligandami powierzchniowymi komórek rakowych, pobudzając komórki NK do uwalniania granulek zawierających cząsteczki cytotoksyczne.
Cząsteczki te tworzą pory błony komórkowej raka i indukują apoptozę, uwalniając zawartość wewnątrzkomórkową, w tym dehydrogenazę mleczanową lub LDH.
Dodaj detergent, aby zmylić komórki rakowe w studzienkach kontrolnych w celu maksymalnego uwolnienia LDH.
Odwirować i przenieść część supernatantów zawierających LDH na płytkę testową.
Dodać odczynnik do oznaczania i inkubować.
LDH przekształca mleczan w pirogronian redukujący NAD+. Diaphorase wykorzystuje NADH do redukcji soli tetrazoliowej, tworząc czerwony produkt formazanu.
Dodaj kwaśny roztwór, aby zatrzymać reakcję enzymatyczną.
Za pomocą czytnika mikropłytek zmierzyć absorbancję formazanu w studzienkach.
Intensywność formazanu jest proporcjonalna do liczby komórek nowotworowych poddanych lizie w badanym dołku, co wskazuje na cytotoksyczność komórek NK wobec komórek nowotworowych.
Najpier
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych