Technika wytwarzania limfocytów CAR T specyficznych dla antygenu
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę mikrodołkową pokrytą rekombinowanymi fragmentami fibronektyny i dodaj aktywowane mysie limfocyty T CD8-dodatnie.
Wprowadź wektory retrowirusowe zawierające transgeniczne RNA, które koduje chimeryczny receptor antygenowy lub CAR.
Przykryj płytkę i zamknij ją w torbie, aby uniknąć zanieczyszczenia. Odwirować płytkę z niską prędkością, aby ułatwić interakcję wirus-komórka.
Fibronektyna wiąże się z wirusem i komórką, kolokalizując je w celu zwiększenia transferu genów za pośrednictwem wirusa.
Po odwirowaniu wyjąć szczelnie zamknięty worek i inkubować płytkę w warunkach fizjologicznych.
Otoczka wektora wirusowego łączy się z błoną komórkową, uwalniając wirusowe RNA i enzymy.
Enzymy wirusowe dokonują odwrotnej transkrypcji uwolnionego RNA i integrują powstałe DNA z genomem gospodarza, umożliwiając komórkom ekspresję CAR związanych z powierzchnią.
CAR składa się z domeny wiążącej antygen specyficznej dla antygenu docelowego i domen sygnalizacyjnych do aktywacji limfocytów T.
Limfocyty CAR T specyficzne dla antygenu są gotowe do dalszych testów.
W pierwszym dniu przygotuj płytki pokryte ludzkim fragmentem fibronektyny, dodając 0,5 mililitra fibronektyny do dołków 24-dołkowej pły
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych