Generowanie pęcherzyków błony plazmatycznej z komórek macierzystych szpiku kostnego

0 views • 3:20 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od hodowli komórek macierzystych szpiku kostnego.

Wprowadź bufor trypsyna-EDTA, aby odłączyć komórki i rozbić grudki komórek, tworząc zawiesinę jednokomórkową.

Odwirować, a następnie usunąć supernatant. Zawiesić osad świeżym podłożem.

Przenieść zawiesinę do strzykawki i podłączyć ją do zespołu filtrującego membranowego.

Nacisnąć tłok i wyrzucić pożywkę zawierającą filtrat.

Odłącz filtr. Napełnić strzykawkę świeżym podłożem. Ponownie podłącz filtr i szybko popchnij tłok.

Ciśnienie cieczy zmusza komórkę do zmierzania w kierunku porów filtra.

W ten sposób powstaje kulisty pęcherzyk błony plazmatycznej lub PMV.

Pęcherzyki te zawierają składniki komórkowe i organelle otoczone błoną.

Zbadaj filtrat pod mikroskopem z odwróconym kontrastem fazowym, aby zaobserwować półprzezroczyste kuliste pęcherzyki.

Wymiary pęcherzyków zgadzają się z wielkością porów membrany filtracyjnej, co potwierdza wytwarzanie PMV.

Aby wytworzyć PMV, najpierw należy wyhodować mysie PMSC w kompletnej pożywce hodowlanej DMEM w jednym dołku sześciodołkowej płytki w wilgotnym inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. Gdy komórki osiągną 90% konfluencji, przepłucz studzienkę 0,5 mililitra bezwapniowego PBS i odłącz komórki 0,5 mililitra 0,25% trypsyny-EDTA.

Po trzech minutach w temperaturze 37 stopni Celsjusza postukaj kilka razy w płytkę dłonią, aby ułatwić dysocjację komórek i zatrzymać trawienie za pomocą 1 mililitra pożywki hodowlanej. Przenieś komórki do 5-mililitrowej stożkowej probówki do odwirowania i ponownie zawieś osad w 4 mililitrach świeżej pożywki hodowlanej. Następnie podziel komórki między dwie studzienki nowej sześciodołkowej płytki i włóż płytkę z powrotem do inkubatora do hodowli komórkowych na 24 godziny.

Następnego dnia zbierz komórki z jednej studzienki przez trawienie trypsyną, jak właśnie pokazano, ponownie zawieszając osad w 0,5 mililitra świeżej pożywki hodowlanej po zebraniu przez odwirowanie. Załaduj komórki do 1-mililitrowej strzykawki insulinowej i podłącz strzykawkę do jednostki filtrującej. Szybko wciśnij tłok, aby przecisnąć komórki przez filtr i wyrzucić wytłaczane medium. Następnie załaduj i dozuj 0,5 mililitra dodatkowej pożywki hodowlanej przez filtr, jak właśnie pokazano, zbierając pożywkę z drugiego wytłaczania.

Wysiewaj 150 mikrolitrów zebranego podłoża do 35-mililitrowego naczynia ze szklanym dnem i pozwól pęcherzykom osiąść przez około 10 minut. Następnie potwierdź obecność PMV pod mikroskopem z odwróconym kontrastem fazowym wyposażonym w kamerę CCD z 20-krotną soczewką obiektywową.

11:11

Oznaczanie partycjonowania błony plazmatycznej dla białek związanych obwodowo

Related Videos

0 Views

09:57

Izolacja i analiza identyfikowalnych i funkcjonalizowanych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z osocza i tkanek stałych

Related Videos

0 Views

02:57

Generowanie komórek dendrytycznych pochodzących ze szpiku kostnego: metoda generowania komórek dendrytycznych ze szpiku kostnego myszy

Related Videos

0 Views

02:18

Generowanie komórek neuronalnych z pluripotencjalnych komórek macierzystych pochodzenia krwionośnego

Related Videos

0 Views

03:58

Generowanie komórek podobnych do komórek Schwanna z komórek zrębu szpiku kostnego

Related Videos

0 Views

09:08

Transdukcja retrowirusowa komórek progenitorowych szpiku kostnego w celu wytworzenia myszy retrogenicznych receptora komórek T

Related Videos

0 Views

09:34

Przygotowanie pęcherzyków błony plazmatycznej z mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego do potencjalnej terapii cytoplazmozastępczej

Related Videos

0 Views

09:05

Generowanie dużej liczby progenitorów szpiku i prekursorów komórek dendrytycznych z mysiego szpiku kostnego przy użyciu nowej strategii sortowania komórek

Related Videos

0 Views

11:37

Protokół transferu mikroRNA do dorosłych hematopoetycznych komórek macierzystych pochodzących ze szpiku kostnego w celu umożliwienia inżynierii komórkowej w połączeniu z celowaniem magnetycznym

Related Videos

0 Views

08:11

Wytwarzanie komórek neuronalnych pochodzących z krwi bez GMO

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026