JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:20 min. • July 8th, 2025
Zacznij od hodowli komórek macierzystych szpiku kostnego.
Wprowadź bufor trypsyna-EDTA, aby odłączyć komórki i rozbić grudki komórek, tworząc zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować, a następnie usunąć supernatant. Zawiesić osad świeżym podłożem.
Przenieść zawiesinę do strzykawki i podłączyć ją do zespołu filtrującego membranowego.
Nacisnąć tłok i wyrzucić pożywkę zawierającą filtrat.
Odłącz filtr. Napełnić strzykawkę świeżym podłożem. Ponownie podłącz filtr i szybko popchnij tłok.
Ciśnienie cieczy zmusza komórkę do zmierzania w kierunku porów filtra.
W ten sposób powstaje kulisty pęcherzyk błony plazmatycznej lub PMV.
Pęcherzyki te zawierają składniki komórkowe i organelle otoczone błoną.
Zbadaj filtrat pod mikroskopem z odwróconym kontrastem fazowym, aby zaobserwować półprzezroczyste kuliste pęcherzyki.
Wymiary pęcherzyków zgadzają się z wielkością porów membrany filtracyjnej, co potwierdza wytwarzanie PMV.
Aby wytworzyć PMV, najpierw należy wyhodować mysie PMSC w kompletnej pożywce hodowlanej DMEM w jednym dołku sześciodołkowej płytki w wilgotnym inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. Gdy komórki osiągną 90% konfluencji, przepłucz studzienkę 0,5 mililit
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych