JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:21 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysi nowotwór czerniaka składający się z neutrofili związanych z nowotworem lub TAN.
TAN wykazują podwyższoną aktywność enzymu fosforybozylotransferazy nikotynamidu lub NAMPT, stymulując angiogenezę, proliferację naczyń krwionośnych w guzach i ułatwiając wzrost guza.
Zmiel tkankę i dodaj enzymy, aby zdegradować macierz tkankową, rozluźniając komórki.
Przefiltruj zawiesinę przez sitko i odwiruj, aby osadzać komórki.
Dodać bufor do lizy, aby zmylić czerwone krwinki, a następnie odwirować i wyrzucić supernatant zawierający resztki komórek.
Wprowadź przeciwciała, aby zablokować komórkowe receptory Fc, unikając w ten sposób nieswoistego barwienia immunologicznego.
Wprowadź znakowany fluoroforem koktajl przeciwciał specyficzny dla markerów powierzchniowych na tanach i barwnika w celu rozróżnienia martwych komórek.
Za pomocą FACS wyizoluj znakowane fluoroforem żywotne TAN i przenieś je na mikropłytkę.
Dodać inhibitor blokujący aktywność NAMPT do wybranych studzienek i inkubować.
Użyj komórek, aby ocenić ich zdolność do stymulacji angiogenezy. Tany leczone inhibitorami wykazują zmniejszoną angiogenezę w porównaniu z nieleczonymi TAN.
W celu izolacji neutrofili związanych z nowotworem
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych