JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:12 min. • July 8th, 2025
Rozpocząć od zawiesiny Mycobacterium bovis BCG, potraktowanej niejonowym środkiem powierzchniowo czynnym, aby zapobiec zbrylaniu się bakterii.
Następnie dodaj odczynnik do biotynylacji i inkubuj.
Ten odczynnik biotynylacyjny, kompleks biotyny skompleksowany w funkcjonalny łącznik, ułatwia wiązanie cząsteczek biotyny z białkami powierzchniowymi bakterii, znakując bakterie.
Po inkubacji odwirować zawiesinę bakteryjną znakowaną biotyną, aby usunąć nieprzereagowany odczynnik biotynylacyjny.
Ponownie zawiesić bakterie w buforze. Dodać roztwór białka fuzyjnego awidyny, rekombinowanego białka składającego się z docelowej domeny antygenowej połączonej z monomeryczną awidyną.
Podczas inkubacji awidyna wiąże się z biotyną, ułatwiając modyfikację powierzchni bakterii za pomocą docelowych antygenów.
Odwirować zawiesinę w celu usunięcia niezwiązanych białek fuzyjnych.
Ponownie zawiesić bakterie pokryte antygenem w buforze zawierającym niejonowy środek powierzchniowo czynny. Powłoka antygenowa na bakterii może wzmocnić jej właściwości w celu wywołania odpowiedzi immunologicznej.
Pracuj w komorze bezpieczeństwa biologicznego przy użyciu środków ochrony osobistej, ponieważ BCG jest patogenem II po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych