Technika hodowli neuronów hipokampa myszy

Weźmy upolowane młode mysie hipokamp w buforze.

Pokrój hipokamp na mniejsze fragmenty i przenieś je do stożkowej rurki.

Umyj chusteczkę buforem. Gdy fragmenty osiądą, usuń bufor. Teraz dodaj świeży bufor i trypsynę.

Podczas inkubacji trypsyna, enzym proteolityczny, trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, rozluźniając neurony hipokampa.

Przetrawioną tkankę przepłukać buforem.

Gdy fragmenty osiądą, usuń bufor. Dodać świeży bufor i kilkakrotnie pipetować tkankę, aby mechanicznie ją zdysocjować, uzyskując zawiesinę jednokomórkową.

Gdy niestrawiona tkanka opadnie, przenieś zawiesinę komórkową na szkiełka nakrywkowe pokryte poli-L-lizyną z podporami woskowymi na płytce hodowlanej zawierającej pożywkę.

Ogniwa przyczepiają się do powierzchni pokrytych poli-L-lizyną poprzez oddziaływania elektrostatyczne.

Teraz umieść szkiełka nakrywkowe przylegające do neuronów skierowane w dół do naczynia zawierającego komórki glejowe korowe lub nieneuronalne w pożywce wolnej od surowicy.

W hodowli podpory woskowe zapobiegają bezpośredniemu kontaktowi między neuronami a komórkami glejowymi, tworząc mikrośrodowisko, w którym czynniki wydzielane przez komórki glejowe sprzyjają przetrwaniu i dojrzewaniu neur