JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:51 min. • July 8th, 2025
Weźmy mózg szczeniaka transgenicznej myszy.
Usuń móżdżek i przeprowadź sekcję mózgu. Oddziel tkankę korowo-hipokampową zawierającą neurony pobudzające wyrażające białka fluorescencyjne.
Przenieść tkankę na płytkę hodowlaną zawierającą bufor.
Zmiel tkankę i przenieś ją do probówki zawierającej papainę.
Papaina trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, rozluźniając komórki, w tym neurony.
Przenieś strawioną tkankę do probówki z białkami BSA, zatrzymując aktywność enzymatyczną i zapobiegając uszkodzeniom komórek.
Mechanicznie dysocjuj tkanki, uwalniając komórki.
Odwirować i usunąć sklarowany osad zawierający zanieczyszczenia i enzymy.
Ponownie zawiesić komórki w pożywkach neuronalnych o niskiej fluorescencji i przefiltrować przez sitko komórkowe, usuwając agregaty komórkowe.
Wykonaj sortowanie komórek aktywowane fluorescencją, aby zidentyfikować i posortować neurony fluorescencyjne.
Przenieś posortowane neurony do probówki mikrowirówkowej i odwiruj. Ponowne zawieszenie neuronów w pożywkach neuronalnych.
Neurony nasienne na szkiełkach nakrywkowych pokrytych poli-L-lizyną na płytce wielodołkowej. Neurony przylegają do pokrytych powierzchni.
Dodaj pożywkę neuronalną. Inkubuj, aby ułatwić w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych