Generowanie progenitorów nerwowych z embrionalnych komórek macierzystych w kulturach jednowarstwowych bez surowicy

Zacznij od hodowli embrionalnych komórek macierzystych myszy.

Umyj komórki buforem, aby usunąć media i resztki komórek.

Dodaj koktajl enzymatyczny, aby oderwać komórki od powierzchni kolby.

Dodaj pożywkę, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną i zebrać komórki w probówce. Odwirować i odrzucić sklarowany sklarat zawierający enzymy.

Ponownie zawiesić komórki w pożywkach do hodowli neuronów wolnych od surowicy.

Wysiewaj komórki w pokrytych żelatyną studzienkach na płytki wielodołkowe.

Inkubować. Embrionalne komórki macierzyste przylegają do powierzchni pokrytej żelatyną. Składniki pożywki, w tym składniki odżywcze, czynniki wzrostu i hormony, ułatwiają proliferację komórek i tworzą monowarstwę.

Przy tej gęstości komórek embrionalne komórki macierzyste wytwarzają i uwalniają optymalne poziomy czynników wzrostu i cytokin.

Cząsteczki te uruchamiają wewnątrzkomórkowe szlaki sygnałowe, ułatwiając różnicowanie embrionalnych komórek macierzystych w progenitory nerwowe.

Wymieszaj żelatynę z 500 mililitrami ciepłego PBS i przykryj dno pojemnika na hodowlę komórkową tylko taką ilością roztworu, aby pokryć powierzchnię. Podczas powlekania żelatyny należy dwukrotnie przepłukać subkonfluentną hodowl