Technika kohodowli do różnicowania ludzkich neuronalnych komórek progenitorowych w neurony

Weźmy hodowlę ludzkich nerwowych komórek progenitorowych lub NPC, wspieranych na macierzy zewnątrzkomórkowej.

NPC są zaprojektowane tak, aby wyrażać białko fluorescencyjne.

Wyrzuć pożywkę i umyj komórki, aby usunąć wszelkie pozostałości pożywki.

Inkubuj kulturę z enzymami, które rozbijają macierz, dysocjując komórki.

Przenieś oderwane komórki do probówki i dodaj pożywkę, aby zneutralizować działanie enzymatyczne.

Odwirować w celu osadzenia komórek, odrzucić supernatant i ponownie zawiesić NPC w pożywce różnicowania neuronów.

Przenieś NPC do ustalonej kokultury astrocytów myszy i neuronów korowych szczurów.

Czynniki wzrostu uwalniane przez ustaloną kokulturę, wraz z kontaktami komórka-komórka NPC z neuronami korowymi i astrocytami, sprzyjają różnicowaniu NPC w dojrzałe neurony.

Dojrzałe neurony wykazują rozszerzone procesy komórkowe i tworzą połączenia synaptyczne.

Pod mikroskopem konfokalnym wykorzystaj sygnał z białek fluorescencyjnych do wizualizacji ludzkich neuronów pochodzących od NPC.

Po wygenerowaniu indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych lub iPSC, indukuj i utrzymuj komórki jako ludzką neuronalną komórkę progenitorową lub hodowlę NPC zgodnie z protokołem teks