Generowanie indukowanych pluripotencjalnych organoidów mózgowych pochodzących z komórek macierzystych

Weźmy kolonie indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych lub iPSC, hodowane na macierzy nośnej.

Dodaj roztwór zawierający enzymy, aby zdysocjować kolonie na pojedyncze komórki.

Przenieś komórki do probówki, odwiruj je i odrzuć supernatant.

Ponownie zawiesić iPSC w pożywce wzrostowej.

Przenieś komórki do mikropłytki zawierającej biokompatybilne włókna polimerowe.

Wirowanie w celu wymuszenia agregacji iPSC, tworzących ciała embrionoidalne lub EB, na rusztowaniu polimerowym.

Przejście na pożywkę indukcji neuronalnej, która wspomaga proliferację i różnicowanie iPSC w nerwowe komórki macierzyste, komórki progenitorowe i niedojrzałe neurony.

Podczas inkubacji komórki ulegają samoorganizacji.

Umieść ciała zarodków na arkuszu z wgłębieniami i dodaj krople zawierające białka macierzy zewnątrzkomórkowej.

Inkubować w celu zestalenia matrycy, osadzając EB.

Przenieś EB do mikropłytki zawierającej pożywkę do konserwacji neuronów. Inkubować.

EB ulegają proliferacji komórkowej, tworząc wypukłości i pączki oraz różnicując się w dojrzałe neurony, tworząc organoidy mózgowe.

Odessać pożywkę pipetą i raz umyć komórki DPBS. Następnie dodaj 500 mikrolitrów roztworu do odrywania komórek lub 0,5