Rozwijanie kulek neuronalnych przy użyciu techniki hodowli wiszącej kropli
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:46 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od jednokomórkowego zawieszenia embrionalnych neuronalnych komórek progenitorowych myszy w pożywce neuropodstawnej.
Pożywka zawiera niezbędne składniki odżywcze do utrzymania żywotności komórek.
Dozuj małe krople tej zawiesiny komórek na pokrywkę nieprzywierającej naczynia hodowlanego, upewniając się, że są od siebie oddalone.
Odwróć pokrywkę, powodując powstanie wiszących kropli.
Umieść pokrywkę nad naczyniem zawierającym bufor, aby stworzyć wilgotne środowisko, które zapobiega parowaniu pożywki i inkubacji.
W wiszących kroplach napięcie powierzchniowe cieczy utrzymuje kształt kropli.
To ograniczenie kształtu ogranicza komórki do ograniczonej przestrzeni bez rozprzestrzeniania się.
Dodatkowo siły grawitacyjne w kroplach kierują komórki w kierunku dolnego obszaru.
Gdy neuronalne komórki progenitorowe wchodzą w bliższy kontakt, spontanicznie agregują, tworząc trójwymiarową strukturę znaną jako kula neuronalna.
Aby przygotować kulki neuronowe, dostosuj gęstość komórek w tej zawiesinie komórkowej do 1 miliona komórek na mililitr za pomocą pożywki NGB. Dodaj 7 mililitrów PBS do dolnej części naczyń hodowlanych. Hoduj neurony korowe jako wiszące krople o pojemności 10 mikroli
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych