Opracowanie kokultury neuronów i makrofagów in vitro
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:44 min. • July 8th, 2025
Zacznij od izolowanych neuronów zwojowych mysiego korzenia grzbietowego w podłożu wzrostowym.
Umieść je na pokrytej polimerem płytce wielodołkowej, aby promować przyczepienie neuronów.
Następnie weź wypreparowaną mysz poddaną eutanazji i wstrzyknij lodowaty PBS do jej jamy otrzewnej.
Delikatnie masuj otrzewną, aby usunąć makrofagi ze ściany otrzewnej.
Ściśnij mysz, aby zebrać płyn otrzewnowy i potraktuj ją buforem do lizy, aby selektywnie lizować czerwone krwinki, które pojawiają się jako zanieczyszczenia. Odwirować i ponownie zawiesić komórki w pożywce hodowlanej.
Przenieś makrofagi do porowatej wkładki umieszczonej w studzience zawierającej hodowane neurony.
Ta kokultura pozwala neuronom i makrofagom znajdować się w bliskiej odległości.
Potraktuj kokulturę db-cAMP i inkubuj, aby ułatwić jej wejście do komórek. To aktywuje neurony do wydzielania cząsteczek sygnałowych.
Te cząsteczki sygnałowe, wraz z db-cAMP, indukują makrofagi do przyjęcia fenotypu proregeneracyjnego i wydzielania niezbędnych czynników do wzrostu neuronów.
Przed założeniem kultury należy wstępnie pokryć 6-dołkową płytkę poli-D-lizyną i lamininą. Następnie inkubować 6-dołkową płytkę z 0,01 poli-D-lizyną w temperat
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych