Używanie pożywki kondycjonowanej makrofagami w celu promowania rozszerzeń neuronów

0 wyświetleń3:32 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od cyklicznego monofosforanu adenozyny lub cAMP, cząsteczki sygnałowej, która reguluje różne funkcje komórkowe. Dodaj cAMP do kokultury neuronów i makrofagów.

Cząsteczki cAMP z pożywki i czynniki wzrostu z neuronów wyzwalają aktywację makrofagów.

Przenieść wkładkę z aktywowanymi makrofagami do innego dołka zawierającego pożywkę do hodowli makrofagów.

Tutaj makrofagi uwalniają cytokiny i chemokiny do pożywki, tworząc kondycjonowaną pożywkę lub CM.

Odwirować CM, aby osadzać składniki komórkowe.

Przenieś supernatant i przefiltruj, aby usunąć zanieczyszczenia komórkowe.

Dodaj pobrany CM do hodowli neuronalnej. Cytokiny i chemokiny w pobranym CM promują rozszerzenie neuronów.

Dodaj schłodzony paraformaldehyd, aby utrwalić komórki.

Dodaj bufor blokujący, aby uniknąć niespecyficznego wiązania przeciwciał. Przemyć, aby usunąć pozostały bufor.

Zastosuj przeciwciała pierwszorzędowe, które są skierowane przeciwko białkom cytoszkieletu neuronów. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.

Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z czerwonym fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.

Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej wizualizuj neurony w kolorze czerwonym z rozszerzeniami.

Cztery godziny po wspólnej hodowli makrofagów neuronów dodaj 2 mikrolitry 100-mikromolowego roztworu db-cAMP do kokultur makrofagów neuronów. Po 24 godzinach napełnij pustą studzienkę 1 mililitrem pożywki do hodowli makrofagów na tej samej 6-dołkowej płytce.

Przenieś wkładkę do hodowli komórkowej w kokulturze makrofagów neuronów do pustej studzienki z pożywką do hodowli makrofagów. Po 72 godzinach odwirować pożywkę kondycjonowaną makrofagami o masie 239 g przez pięć minut w celu usunięcia składników komórkowych. Przepuść supernatant przez filtr 0,2 mikrometra, aby usunąć wszelkie pozostałe zanieczyszczenia komórkowe.

W tej procedurze należy wstępnie pokryć szkiełko 8-dołkowe poli-D-lizyną i lamininą. Następnie uzyskaj powiązane dorosłe neurony DRG w podłożu neuropodstawnym, uzupełnione witaminą B 27. Płytka 5 x 104 komórki na studzienkę na wstępnie powlekanym szkiełku z 8 dołkami.

Następnie umieść szkiełko komorowe w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza na dwie godziny, pozwalając komórkom przymocować się do dna. Następnie zastąp pożywkę hodowlaną rozmrożoną, kondycjonowaną pożywką, która jest wstępnie podgrzana do 37 stopni Celsjusza. 15 godzin po wstępnym posiewie usuń pożywkę i raz umyj komórki PBS.

Następnie dodaj 200 mikrolitrów lodowatego 4% roztworu paraformaldehydu do studzienek i inkubuj komórki z roztworem paraformaldehydu przez 20 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Następnie inkubuj utrwalone komórki z roztworem przeciwciała pierwotnego, rozcieńczonym 10% normalną surowicą kozią przez cztery godziny w temperaturze pokojowej lub przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Następnie wykonaj zdjęcia za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego, aby uwidocznić przerost neurytów.

09:23

Testy kokulturowe w celu zbadania stymulacji makrofagów i mikrogleju inwazji glejaka

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:02

Ulepszony test oparty na białku zielonej fluorescencji do badania wzrostu neurytów w neuronach pierwotnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:41

Test wzrostu neurytów i ocena neurotoksyczności z ludzkimi neuronami pochodzącymi z neuronów progenitorowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:34

Analiza obrazowa interakcji neuron-glej w systemie kohodowli neuronów i gleju opartym na platformie hodowli mikroprzepływowej (MCP)

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:44

Opracowanie kokultury neuronów i makrofagów in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:03

Inicjowanie szybkiej rozbudowy neurytów i tworzenie funkcjonalnych połączeń neuronalnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:28

Hodowla mikrogleju z ośrodkowego układu nerwowego noworodków i dorosłych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:54

Wysoce wydajna transfekcja ludzkich makrofagów THP-1 metodą nukleofekcji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:46

Posiew czynnika stymulującego tworzenie kolonii makrofagów Zróżnicowane ludzkie makrofagi pochodzące z monocytów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:52

Kokultury neuronów i makrofagów w celu aktywacji makrofagów wydzielających czynniki molekularne z aktywnością wzrostu neurytów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026