JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
Zacznij od cyklicznego monofosforanu adenozyny lub cAMP, cząsteczki sygnałowej, która reguluje różne funkcje komórkowe. Dodaj cAMP do kokultury neuronów i makrofagów.
Cząsteczki cAMP z pożywki i czynniki wzrostu z neuronów wyzwalają aktywację makrofagów.
Przenieść wkładkę z aktywowanymi makrofagami do innego dołka zawierającego pożywkę do hodowli makrofagów.
Tutaj makrofagi uwalniają cytokiny i chemokiny do pożywki, tworząc kondycjonowaną pożywkę lub CM.
Odwirować CM, aby osadzać składniki komórkowe.
Przenieś supernatant i przefiltruj, aby usunąć zanieczyszczenia komórkowe.
Dodaj pobrany CM do hodowli neuronalnej. Cytokiny i chemokiny w pobranym CM promują rozszerzenie neuronów.
Dodaj schłodzony paraformaldehyd, aby utrwalić komórki.
Dodaj bufor blokujący, aby uniknąć niespecyficznego wiązania przeciwciał. Przemyć, aby usunąć pozostały bufor.
Zastosuj przeciwciała pierwszorzędowe, które są skierowane przeciwko białkom cytoszkieletu neuronów. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z czerwonym fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Za pomocą mikroskopii fluor
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych