JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:12 min • July 8th, 2025
Zacznij od wielodołkowej płytki zawierającej genetycznie zmienione astrocyty. Komórki te przykleja się do szkiełka nakrywkowego umieszczonego w pożywce astrocytów.
Te genetycznie zmodyfikowane komórki wyrażają czynniki transformacji, które wymuszają ich przejście do neuronów. Ten proces nazywa się przeprogramowaniem neuronów.
Weźmy pożywkę różnicującą neurony zawierającą określone cząsteczki i suplement B27. Razem składniki te dostarczają niezbędnych składników odżywczych i czynników różnicowania.
Zastąp pożywkę astrocytów pożywką różnicowania neuronów.
Inkubuj astrocyty przez wymagany czas.
Podczas inkubacji czynniki transformacyjne wyrażane przez astrocyty wyzwalają sekwencję zdarzeń molekularnych, które umożliwiają przekształcenie astrocytu w neuron.
Przekształcone neurony mają mniejsze ciała komórkowe i wydłużone procesy, podobne do typowych neuronów.
Przygotuj pożywkę do różnicowania neuronów, dodając jeden mililitr suplementu B27 do 49 mililitrów podstawowej pożywki hodowlanej. Po 24 do 48 godzinach, w zależności od tego, czy komórki zostały transdukowane, czy transfekowane, zastąp pożywkę astrocytów jednym mililitrowym pożywką różnicującą neurony na studzienkę. Hoduj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 9% dwutlenkiem węgla.
Aby zwiększyć skuteczność przeprogramowywania, uzupełnij pożywkę różnicowania neuronów forskoliną i dorsomorfiną do końcowego stężenia odpowiednio 30 mikromolów i jednego mikromola podczas zastępowania pożywki astrocytów pożywką różnicującą. Decydując się na leczenie komórek forskoliną i dorsomorfiną, należy podać drugą dawkę Dorsomorphin dwa dni po początkowym leczeniu. Dodaj ten drugi zabieg bezpośrednio do pożywki hodowlanej.