Przygotowanie swobodnie unoszących się kultur warstwowych z dorosłego ludzkiego mózgu

Weźmy ludzką tkankę mózgową zanurzoną w roztworze do krojenia. Biologiczne pH roztworu i składniki odżywcze pomagają w utrzymaniu funkcjonalności tkanek.

Usuń najbardziej zewnętrzną warstwę opon mózgowych i przytnij tkankę, aby uzyskać płaską powierzchnię.

Zetrzyj nadmiar roztworu z tkanki. Przymocuj przyciętą tkankę do krążka próbki za pomocą bloku agarozy, utrzymując tkankę w kontakcie z blokiem w celu ułatwienia cięcia.

Umieść krążek w tacce buforowej z wibratomem i przykryj tkankę lodowatym roztworem do krojenia.

Za pomocą wibratomu wygeneruj jednolite plasterki, które zachowują architekturę tkanki.

Odetnij nadmiar tkanki, zapewniając stałą proporcję istoty szarej i białej.

Umieścić plastry na płytce wielodołkowej zawierającej pożywkę hodowlaną i inkubować.

Plastry pozostają zawieszone w pożywce, aby zapewnić równomierny dostęp do składników odżywczych, technika znana jako kultura plastrów w swobodnych pływaniach.

Regularnie uzupełniaj kulturę pożywką uzupełnioną neuronalnym czynnikiem wzrostu, aby utrzymać żywotność tkanek.

Przenieść próbkę na szalkę Petriego zawierającą roztwór do krojenia. Za pomocą drobnych narzędzi chirurgicznych ostrożnie usuń jak najwięcej pozostałych op