Technika przedłużonej inkubacji tkanki neuronalnej siatkówki
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:30 min. • July 8th, 2025
Weź nienaruszone oko myszy w sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym lub aCSF i nacinaj, aby wyizolować muszlę oczną zawierającą siatkówkę.
Traktuj roztworem enzymatycznym, aby usunąć wewnętrzną błonę ograniczającą, odsłaniając komórki neuronalne.
Zanurz tkankę w roztworze hamującym, aby zatrzymać trawienie, i umyj, aby usunąć nadmiar roztworu.
Umieść tkankę w specjalistycznym inkubatorze w niskiej temperaturze, aby spowolnić metabolizm komórkowy, zachowując tkankę.
Inkubator ten składa się z głównej komory z siatką do montażu tkanek. Komora jest wypełniona płynem CSF, a jego temperatura i pH są kontrolowane w celu zachowania funkcjonalności tkanki.
Aby wyeliminować zanieczyszczenie mikrobiologiczne, aCSF jest pompowany do innej komory i poddawany działaniu promieniowania ultrafioletowego w celu zabicia wszelkich drobnoustrojów.
Wysterylizowany aCSF jest następnie pompowany z powrotem do komory głównej.
Aby wyizolować siatkówkę, zdejmij muszlę oczną, oddziel siatkówkę od otaczającej tkanki i włóż ją z powrotem do inkubatora.
W celu przygotowania całego wierzchowca siatkówki należy natychmiast wyłuszczyć oczy zwierzęcia poddanego eutanazji. Wykonaj małe nacięcie wzdłuż ora serrata i umi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych