Technika przedłużonej inkubacji tkanki neuronalnej siatkówki

0 wyświetleń3:30 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź nienaruszone oko myszy w sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym lub aCSF i nacinaj, aby wyizolować muszlę oczną zawierającą siatkówkę.

Traktuj roztworem enzymatycznym, aby usunąć wewnętrzną błonę ograniczającą, odsłaniając komórki neuronalne.

Zanurz tkankę w roztworze hamującym, aby zatrzymać trawienie, i umyj, aby usunąć nadmiar roztworu.

Umieść tkankę w specjalistycznym inkubatorze w niskiej temperaturze, aby spowolnić metabolizm komórkowy, zachowując tkankę.

Inkubator ten składa się z głównej komory z siatką do montażu tkanek. Komora jest wypełniona płynem CSF, a jego temperatura i pH są kontrolowane w celu zachowania funkcjonalności tkanki.

Aby wyeliminować zanieczyszczenie mikrobiologiczne, aCSF jest pompowany do innej komory i poddawany działaniu promieniowania ultrafioletowego w celu zabicia wszelkich drobnoustrojów.

Wysterylizowany aCSF jest następnie pompowany z powrotem do komory głównej.

Aby wyizolować siatkówkę, zdejmij muszlę oczną, oddziel siatkówkę od otaczającej tkanki i włóż ją z powrotem do inkubatora.

W celu przygotowania całego wierzchowca siatkówki należy natychmiast wyłuszczyć oczy zwierzęcia poddanego eutanazji. Wykonaj małe nacięcie wzdłuż ora serrata i umieść oczy w pożywce Ames lub CSF z dopływem karbonu w temperaturze pokojowej. Następnie natychmiast usuń rogówkę, soczewkę i ciało szkliste, przecinając wzdłuż ora serrata małymi nożyczkami i usuń je kleszczami. Umieścić tkankę w systemie inkubacji w temperaturze pokojowej.

Aby usunąć wewnętrzną błonę ograniczającą, przenieś muszlę oczną zawierającą siatkówkę do małego szklanego słoika zawierającego papainę, L-cysteinę, EDTA i DNAzę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 20 minut. Nałóż karbogen na roztwór przez pokrywkę, ale nie bąbelkuj. Zatrzymaj trawienie enzymatyczne, umieszczając tkankę w roztworze ovomukoidu i BSA na 10 minut w Earl's BSS. Następnie dokładnie umyj chusteczkę za pomocą płynu mózgowo-rdzeniowego.

Następnie przenieś tkankę do systemu inkubacji i obniż temperaturę do około 15 do 16 stopni Celsjusza. Następnie przenieś tkankę siatkówki do mikroskopu; Odizoluj siatkówkę od muszli ocznej i pokrój ją na cztery części żyletką. Jeśli wymagana jest cała siatkówka, wykonaj cztery małe nacięcia na obrzeżach siatkówki, aby mogła leżeć płasko.

Tkanka ta może być teraz przeniesiona do mikroskopu w celu elektrofizjologii lub przechowywana w Braincubatorze. Tkanka jest przechowywana w głównej komorze zawierającej sondy do pomiarów pH i temperatury. Druga komora jest odizolowana od komory głównej i jest wystawiona na działanie światła UVC o mocy 1,1 W w celu napromieniowania bakterii unoszących się w roztworze. Użyj pompy perystaltycznej do cyrkulacji CSF przez dwie komory oraz termoelektrycznej zimnej płyty Peltiera do chłodzenia lub ogrzewania głównej komory.

10:45

Przygotowanie ostrych wycinków z grzbietowego hipokampa do zapisu całych komórek i rekonstrukcji neuronów w zakręcie zębatym dorosłych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:49

Konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa dynamiki wapnia w ostrych wycinkach tkanki trzustkowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:07

In vivo (in vivo) Obrazowanie wapniowe zespołów neuronalnych w sieciach pierwotnych neuronów czuciowych w nienaruszonych zwojach korzenia grzbietowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

13:02

Izolowany preparat siatkówki do rejestrowania odpowiedzi świetlnej z genetycznie znakowanych komórek zwojowych siatkówki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:24

Hodowla neuronów zwojowych siatkówki z glejem osłonki węchowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:15

Poklatkowe obrazowanie konfokalne dynamiki dendrytycznej neuronów w eksplantatach siatkówki myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:32

Zoptymalizowany protokół przygotowania całej siatkówki do obrazowania i immunohistochemii

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:30

Przedłużona inkubacja ostrej tkanki neuronalnej do elektrofizjologii i obrazowania wapnia

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:56

Metodologia biomimetycznej neuromodulacji chemicznej siatkówki szczura za pomocą neuroprzekaźnika glutaminianu in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:52

Długotrwała, pozbawiona surowicy hodowla organtypowych eksplantatów siatkówki myszy z nienaruszonym nabłonkiem barwnikowym siatkówki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026