Izolacja i hodowla dorosłych nerwowych komórek macierzystych ze strefy podmodzelowej myszy

Zacznij od mózgu myszy na schłodzonej matrycy mózgowej.

Uzyskaj przekroje zawierające strefę podmodzelową lub SCZ. Przenieść sekcję do zimnego bufora fosforanowego.

Pod mikroskopem preparacyjnym wytnij część SCZ.

Pokrój rozciętą SCZ na mniejsze kawałki.

Przenieś te kawałki do buforu do wytrawiania. Inkubować, aby oddzielić komórki od tkanki.

Odwirować i wyrzucić supernatant. Ponownie zawiesić komórki w odpowiednim podłożu.

Przenieś komórki na płytkę hodowlaną i dodaj określone czynniki wzrostu.

Dorosłe nerwowe komórki macierzyste dzielą się, tworząc skupiska zwane neurosferami.

Niewłaściwa dystrybucja składników odżywczych w skupiskach komórkowych ogranicza wzrost komórek.

Aby rozproszyć skupiska, odwirować i wyrzucić supernatant. Ponownie zawiesić klastry w buforze dysocjacyjnym i inkubować.

Pipetować roztwór w górę i w dół, aby wytworzyć pojedyncze komórki.

Odwirować i wyrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić komórki i przenieść je do odpowiedniego podłoża, aby uzyskać monowarstwę.

Po wypreparowaniu przenieś mózg myszy do zimnego buforu PBS i przepłucz go dwukrotnie, aby usunąć nadmiar krwi. Następnie umieść mózg w macierzy mózgowej na lodzie i wykonaj nacięcia koronalne, aby uzys