JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:44 min. • July 8th, 2025
Weź naczynie hodowlane pokryte substratem do hodowli komórkowych, aby ułatwić adhezję komórek.
Naczynie zawiera jednodołkową wkładkę hodowlaną bez podstawy przymocowanej do jej środka, tworząc zdefiniowaną komorę. Kontur tej komory jest zaznaczony na szalce, aby obserwować migrację komórek.
Wprowadź zawiesinę komórkową do przedziału, który zawiera komórki śródbłonka okołokomorowego lub PVEC, komórki wyściełające naczynia krwionośne w mózgu i interneurony, które migrują wzdłuż PVEC podczas rozwoju mózgu.
Dodaj pożywkę do kokultury do naczynia, aby utrzymać wilgoć, i inkubuj, aby ułatwić przyleganie komórek do podłoża.
Usunąć wkładkę, aby wyeliminować barierę fizyczną; odświeżyć podłoże i ponownie rozpocząć inkubację.
PVEC namnażają się, rozszerzając sieć komórek śródbłonka poza granicę wstawienia.
PVEC wydzielają czynniki, które działają jak wskazówki naprowadzające, kierując interneurony do migracji wzdłuż sieci PVEC.
Kokultura wykazująca migrację międzyneuronową jest gotowa do analizy.
Aby przeprowadzić test kohodowli, zawiesić 30 000 interneuronów GABA-ergicznych i 30 000 ludzkich komórek śródbłonka okołokomorowego w 70 mikrolitrach pożywki do kohodowli. Następnie zasiej ten roztwór komórkowy w komorze z jedną studzienką. Po 48 godzinach wyjmij wkładkę. Inkubuj kokulturę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla przez pięć dni.