JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:18 min. • July 8th, 2025
Weźmy perfundowany mózg myszy zawierający guz.
Etap perfuzji usuwa krążące komórki odpornościowe, ale zachowuje komórki naciekane przez nowotwór.
Odizoluj tkankę zawierającą guz.
Teraz mechanicznie oddziel tkankę.
Siła mechaniczna rozluźnia tkankę, uwalniając komórki.
Przenieś zdysocjowaną tkankę do probówki.
Odwirować i wyrzucić sklarowany osad zawierający zanieczyszczenia.
Ponownie zawiesić tkankę w roztworze trawiącym zawierającym kolagenazę i DNazę.
Kolagenaza degraduje macierz zewnątrzkomórkową, uwalniając komórki. DNaza degraduje zanieczyszczające DNA.
Dodaj bufor, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Przefiltrować zawiesinę, aby usunąć agregaty komórkowe i uzyskać zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować i wyrzucić supernatant.
Zawieś ponownie komórki w ośrodku o gradiencie o dużej gęstości. Teraz nałóż na siebie medium gradientowe o mniejszej gęstości, tworząc gradient separacji z przejrzystym interfejsem.
Odwirować do oddzielnych warstw. Komórki odpornościowe gromadzą się na styku ośrodków gradientowych, podczas gdy szczątki komórkowe unoszą się na wierzchu.
Zbierz komórki odpornościowe do dalszej analizy.
W tej procedurze, używając czystej, jednosiecznej żyletki, wyizoluj obs
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych