Metoda in vitro do generowania rusztowań astrocytów w mikrokolumnach hydrożelowych

Weź naczynie hodowlane zawierające łódź z mikrokolumną składającą się z wydrążonych rurek o określonej średnicy.

Mikrokolumny, wykonane z hydrożelu, są wypełnione buforem, aby zapobiec wysuszeniu.

Pod mikroskopem stereoskopowym usuń bufor i dodaj lodowaty roztwór kolagenu, składnik macierzy zewnątrzkomórkowej.

Wprowadź pożywkę wzdłuż wewnętrznej krawędzi naczynia, aby utrzymać nawodnienie kolumny. Inkubuj w warunkach fizjologicznych, aby kolagen mógł się spolimeryzować, tworząc powłokę wewnątrz mikrokolumn.

Dodaj astrocyty do wnętrza mikrokolumn i inkubuj, aby promować adhezję astrocytów do kolagenu.

Następnie napełnij naczynie pożywką i utrzymuj je w warunkach fizjologicznych.

Ze względu na wąską średnicę mikrokolumn astrocyty uzyskują dwubiegunową morfologię z procesami rozciągającymi się wzdłuż długości.

Z biegiem czasu astrocyty samoorganizują się, tworząc trójwymiarowe rusztowanie zawierające gęste wiązki procesów astrocytów.

Rusztowanie astrocytów w obudowie hydrożelowej jest gotowe do dalszych testów.

Wewnątrz komory bezpieczeństwa biologicznego przygotuj 1 miligram na mililitr roztworu kolagenu typu I z ogona szczura w pożywce do kohodowli, a następnie umieść go na lodzie.