Replikacja zróżnicowanych neuronów pochodzących z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:20 min. • July 8th, 2025
Zacznij od dużej płytki hodowlanej zawierającej ludzkie pluripotencjalne zróżnicowane neurony pochodzące z komórek macierzystych z gęstą siecią neuronalną.
Inkubuj te neurony za pomocą łagodnych enzymów proteolitycznych, aby oderwać je od płytki, podnosząc je jako prześcieradło.
Przy ciągłej inkubacji enzymy częściowo przerywają połączenia komórkowe, rozluźniając sieci neuronowe.
Dodaj pożywkę hodowlaną, aby zatrzymać aktywność enzymu.
Kilkakrotnie pipetuj odłączone neurony, aby oddzielić je od siebie.
Przefiltruj neurony przez sitko komórkowe, aby usunąć grudki komórek i zebrać poszczególne neurony.
Odwirować i usunąć supernatant. Zawieś je ponownie w pożywce wzrostowej.
W celu ponownego posiewu umieść te neurony na polimerze i płytce wielodołkowej pokrytej białkiem adhezyjnym. Inkubuj, aby umożliwić ich przywiązanie.
Neurony wykorzystują składniki odżywcze z pożywki, aby zachować żywotność. Regularnie wymieniaj pożywkę hodowlaną, aby utrzymać poziom składników odżywczych.
Inkubuj dalej, aby umożliwić dojrzewanie neuronów i tworzenie połączeń między nimi.
Zacznij od delikatnego przepłukania płytki zróżnicowanych neuronów za pomocą PBS. Rozprowadź PBS wzdłuż ścianki płytki, a nie b
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych