Opracowywanie ludzkich organoidów nerwów ruchowych pochodzących z iPSC przy użyciu chipa mikroprzepływowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:23 min. • July 8th, 2025
Weźmy ludzkie indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste lub iPSC w bogatej w składniki odżywcze pożywce z komórkami macierzystymi z inhibitorami kinazy Rho.
Inhibitory wnikają do komórek i blokują enzymy kinazy Rho, zapobiegając apoptotycznej śmierci komórki.
Komórki wykorzystują składniki odżywcze do namnażania się i spontanicznej agregacji, tworząc trójwymiarowy klaster komórek zwany sferoidą.
Stopniowo zastąp pożywkę pożywką do indukcji neuronalnej. Modulatory sygnalizacyjne z pożywki napędzają różnicowanie komórek macierzystych w komórki nerwowe.
Zastąp pożywką neuronalną bogatą w czynnik wzrostu, aby zróżnicować komórki sferoidalne w neurony ruchowe i utworzyć sferoidę neuronu ruchowego lub MNS.
Przenieść te MNS do pokrytego polimerem chipa mikroprzepływowego zawierającego pożywkę dojrzewającą.
Czynniki wzrostu nerwów w pożywce stymulują aksony lub dłuższe wypustki neuronów do wzrostu ze sferoidy i rozciągania się przez mikrokanał chipa.
W ten sposób powstaje organoid nerwu ruchowego, trójwymiarowy model tkanki nerwu ruchowego.
Aby indukować różnicowanie komórek 3D iPS w neuronach ruchowych, zasiaj 4 x 104 komórek iPS na studzienkę do odpowiedniej liczby dołków 96-dołkow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych