Generowanie prekursorów interneuronów korowych z embrionalnych komórek macierzystych myszy

Weźmy mysie embrionalne komórki macierzyste zawieszone w pożywce bez surowicy zawierającej inhibitory drobnocząsteczkowe.

Wysiewaj komórki na nieprzylegającej płytce hodowlanej, umożliwiając im namnażanie się i agregację w celu utworzenia trójwymiarowych ciał zarodkowych lub EB.

Dodatkowo inhibitory blokują nieneuronalne szlaki sygnałowe i indukują różnicowanie embrionalnych komórek macierzystych w kierunku losu neuronów korowych.

Przenieś EB do probówki, odwiruj i usuń supernatant.

Zawiesić EB w roztworze zawierającym koktajl enzymatyczny i DNazę.

Enzymy dysocjują EB na pojedyncze komórki, podczas gdy DNaza degraduje zanieczyszczające DNA.

Dodać pożywkę bez surowicy zawierającą inhibitory, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną, a następnie odwirować i usunąć supernatant zawierający enzymy.

Zawiesić komórki w pożywkach zawierających inhibitory małocząsteczkowe i przenieść je na płytki hodowlane pokryte czynnikami adhezyjnymi.

Komórki przyczepiają się do powlekanej powierzchni płytki.

Inhibitory zapobiegają apoptotycznej śmierci komórek i indukują różnicowanie komórkowe w celu uzyskania komórek progenitorowych interneuronów korowych.

Rozpocznij hodowlę komórek jako ciał embrionalnych