Generowanie progenitorów nerwowych z embrionalnych komórek macierzystych myszy metodą wiszącej kropli

Weźmy zawiesinę embrionalnych komórek macierzystych myszy.

Odwirować, usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki w pożywce różnicowania neuronów.

Umieścić kropelki zawiesiny po wewnętrznej stronie pokrywy płytki hodowlanej.

Dodaj bufor do dolnej płyty, aby zapobiec wysychaniu kropel. Umieść pokrywkę na dolnej płycie, tworząc wiszącą kulturę kroplową i inkubuj.

Ze względu na grawitację komórki grupują się i tworzą trójwymiarowe agregaty zwane ciałami embrionalnymi lub EB.

Umieścić kropelki na płytce zawierającej pożywkę różnicującą i inkubować pod wpływem mieszania w celu wzrostu EBs.

Odwirować i usunąć pożywkę; ponownie zawiesić EB w pożywce różnicującej uzupełnionej kwasem retinowym, przenieść je na płytkę hodowlaną i inkubować.

Kwas retinowy dostaje się do komórek i wyzwala tworzenie kompleksu transkrypcyjnego. Kompleks indukuje ekspresję genów, wywołując różnicowanie w neuronalne komórki progenitorowe.

Zróżnicowane EB są gotowe do dalszych zastosowań.

Zacznij od skonfigurowania hodowli komórek wiszących kroplowych. W przypadku 10-centymetrowej płytki do hodowli komórkowej dostosuj stężenie do 500 komórek na 20 mikrolitrów pożywki różnicującej. Przygotuj wystarczającą ilość z