Izolowanie indukowanych kolonii nerwowych komórek progenitorowych pochodzących z fibroblastów dorosłego człowieka
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:38 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od przylegającej hodowli indukowanych kolonii nerwowych komórek progenitorowych pochodzących z dorosłych ludzkich fibroblastów na płytce wielodołkowej pokrytej lamininą.
Umyj kolonie buforem, aby usunąć nieprzylegające komórki, a następnie dodaj świeży bufor.
Zeskrob wokół poszczególnych kolonii, aby usunąć otaczające komórki.
Przenieś kolonie do świeżych studzienek pokrytych lamininą zawierających pożywkę neuroindukcyjną.
Mechanicznie zdezagregować kolonie, aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową.
Laminina, białko macierzy zewnątrzkomórkowej, oddziałuje z białkami powierzchniowymi komórek progenitorowych, ułatwiając przyleganie komórek do powierzchni studzienki.
Dodaj inhibitor drobnocząsteczkowy, który wnika do komórek i blokuje specyficzne kinazy białkowe, zapobiegając apoptozie komórkowej.
Czynniki wzrostu i małe cząsteczki obecne w pożywce neuroindukcyjnej ułatwiają proliferację komórek progenitorowych.
Okresowo wymieniaj pożywkę, aby uzupełnić składniki odżywcze, ułatwiając dalszą proliferację progenitorów.
Zlewająca się kultura lub w pełni pokryta warstwa komórkowa wskazuje na pomyślną ekspansję indukowanych nerwowych komórek progenitorowych.
Dzień później odessaj la
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych